Desenvolvimento do Imunoensaio de ELISA para Detecção do Hormônio Acil-Grelina

andrei figueiredo ribeiro, Vanessa Valgas dos Santos

Resumo


Os imunoensaios surgiram em 1959, quando foi demonstrado que os anticorpos poderiam se ligar seletivamente a diferentes moléculas, entre elas os hormônios, mensageiros químicos peptídicos ou esteroidais de grande interesse terapêutico. Dentre os hormônios passíveis de mensuração, a grelina, um peptídeo multifuncional, produzido e secretado principalmente pela região do fundo do estômago e responsável pelo aumento da ingesta alimentar, tornou-se alvo na cirurgia bariátrica de Y em Roux, sendo sua diminuição sorológica um dos alvos da redução estomacal. Sabendo que os kits de detecção hormonal são importados e sua utilização na rotina laboratorial são dependentes da disponibilidade no país e dos preços de mercado, esta pesquisa tem como objetivo desenvolver uma técnica de ELISA sanduiche para realização da mensuração das concentrações salivares e sorológicas de grelina. Para isto, anticorpos monoclonais anti-grelina serão diluídos e imobilizados em placas de polietileno de 96 wells. A seguir, será realizado o bloqueio das regiões que não foram ocupadas pelo anticorpo. Concentrações padrão de grelina serão adicionadas a placa, e anticorpos policlonais para o hormônio marcados com peroxidase serão utilizados para a determinação hormonal, os resultados serão obtidos através da leitura da absorbância em espectrofotômetro. Além disso, serão realizados os procedimentos de validação da metodologia para garantir através de testes experimentais que as placas de ELISA atendem aos requisitos de aplicabilidade, assegurando a confiabilidade dos resultados. Desta maneira, os ensaios de sensibilidade, linearidade, seletividade e precisão serão executados. Através do desenvolvimento desta proposta, será possível quantificar as concentrações de grelina nos mais variados períodos de tempo após a cirurgia bariátrica, bem com correlacionar os retornos plasmáticos do hormônio grelina com um possível reganho de peso pós-cirúrgico. Vale ressaltar que através da divulgação da metodologia, será possível reduzir de maneira significativa o valor das pesquisas que tenham como objetivo a quantificação de grelina em diferentes fluidos biológicos.

Palavras-chave


ELISA; Grelina; Imunoensaio



REVISTA UNIPLAC
ISSN 2447-2107
EDITORA UNIPLAC | PORTAL DE REVISTAS UNIPLAC
e-mail: propepg@uniplaclages.edu.br | Fone: (49) 3251-1009
Copyright 2012. Editora UNIPLAC